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赤峰市特教学校重度感音性聋分子病因学分析——GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告
朱秀辉;刘新;戴朴;于飞;孙勍;孙捍军;袁永一;朱庆文;李梅;目的调查内蒙古赤峰市聋哑学校重度感音性耳聋病因学情况。方法对赤峰市聋哑学校140名学生进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试。所有受检学生均采集外周血并提取DNA,进行线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变检测、GJB2基因突变检测。结果 1例(0．71％)存在线粒体DNA A1555G点突变;16例(11．43％)存在GJB2 235delC纯合突变,19例(13．57％)存在GJB2 235delC杂合突变。结论赤峰市耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率,并呈现明显的地域特点。通过聋病分子诊断,可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。
人MCL1基因表达载体的构建及在293细胞中的表达
郭维维;杨卫平;马龙;许阳;胡博华;目的构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCL1)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MCL1mRNA的表达,Western Blot(蛋白质印迹)方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,Western Blot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。
内耳支持细胞促进羊水干细胞定向分化为神经元的可能调控机制研究
宗凌;姜鸿彦;目的 小鼠内耳支持细胞能诱导羊水干细胞(amniotic fluid stem cells,AFS)定向分化为功能性神经元，但其可能的调控机制仍未明确。本研究从AFS接种密度、内耳支持细胞来源及细胞周期蛋白激酶抑制因子P27kip1表达差异入手，研究上述因素与AFS神经元定向分化的关系。方法 分别将不同密度AFS(2×105、4×105、6×105、8×105、10×105)，接种在内耳支持细胞饲养层表面，观察不同密度对神经元分化突起数量和长度的影响；将AFS分别接种于基底膜和前庭组织来源的饲养层表面，比较内耳支持细胞P27kip1表达差异及其对神经元分化的影响。结果 AFS以高密度(10×105)接种于饲养层能产生更多形态典型的神经元(20倍镜视野下，平均208±25.7条神经突起)，相对于低密度(2×105)接种(20倍镜视野下，平均41±12.3条神经突起)存在统计学差异(P<0.01)；随着接种细胞数的增加，神经突起的数量急剧增多，而神经突起的长度基本保持不变(平均长度88±7.8μm)(P>0.05)。前庭来源饲养层促分化能力较基底膜强，两种饲养层细胞均表达内耳支持细胞标记物P27kip1，前庭P27kip1表达量(79.8±8.0%)明显高于基底膜(46.9±9.7%)(P<0.01)；内耳支持细胞饲养层P27kip1表达量与分化所得的神经突起的数量和长度呈正相关。结论 AFS接种密度以及内耳支持细胞P27kip1表达水平可能共同参与调控AFS向神经元的定向分化。
宁夏回族自治区石嘴山市平罗县育龄女性常见遗传性耳聋基因突变携带者筛查分析
潘丽华;于辛酉;马小玲;芦瑞萍;赵红梅;田树娟;张希维;安莉娜;马辉芳;李桢;田乐;目的 通过对宁夏回族自治区石嘴山市平罗县听力正常育龄女性及携带遗传性耳聋基因女性的配偶开展耳聋基因检测，分析平罗县耳聋基因特点及差异，探讨平罗县遗传性耳聋的预防方式。方法 选择2020年7月至2022年2月就诊于平罗县妇幼保健院听力正常的未孕及孕17周以内的育龄女性1500例为研究对象。采用二代测序法对育龄女性行遗传性耳聋基因筛查；对携带者配偶行相同基因全长测序；对携带相同基因突变的夫妇行介入性产前诊断。结果 1500例平罗县育龄女性遗传性耳聋基因突变携带者74例，携带率4.93%；携带GJB2基因突变30例，携带率2.00%；携带SLC26A4基因突变27例，携带率1.80%；携带药物性耳聋基因突变12例；携带率0.80%，其中m.7444G>A位点突变6例；携带GJB3基因突变2例，携带率0.13%；携带TMC1基因突变2例，携带率0.13%；携带GJB3与SLC26A4基因多杂合突变1例，携带率0.07%。夫妇携带相同常染色体耳聋基因2例，其中1例行产前诊断，胎儿未检出基因突变。回族孕早期女性常见耳聋基因突变携带率、SLC26A4基因携带率均低于汉族，差异有统计学意义（P<0.05)。结论 平罗县听力正常育龄女性中汉族女性遗传性耳聋基因携带率高于回族女性，扩大筛查基因及位点数将有利于不同基因型的高危携带者的检出，有利于完善平罗县耳聋基因热点图谱，为耳聋防控提供参考。
新型冠状病毒感染后分泌性中耳炎临床特点分析
王磊;韩浩伦;王刚;孙剑雄;李保卫;周莹;张艺俨;孙喆喆;孙和方;吴玮;目的 分析新型冠状(新冠)病毒感染后分泌性中耳炎（otitis media with effusion,OME）发病情况及临床特点。方法 回顾性选取2018年12月至2019年1月、2021年12月至2022年1月、2022年12月至2023年1月中国人民解放军总医院第九医学中心耳鼻喉科门诊就诊患者21 454例，其中OME患者201例。根据北京地区疫情流行及政府管控政策（公共场所佩戴口罩、减少聚集、居家隔离、疫苗接种等）时间，将201例OME患者分为疫情前组68例（2018年12月至2019年1月）、防控期组30例（2021年12月至2022年1月）、爆发期组103例（2022年12月至2023年1月）。收集201例OME患者资料，分析新冠病毒感染相关OME人口学特征及发病特点。结果 防控期组OME就诊率（0.40%）较疫情前组（0.82%）显著下降，爆发期组（1.82%）较疫情前组、防控期组升高了51.5%与243.3%，差异均有统计学意义（P<0.01）。爆发期组92.2%的OME是新冠病毒感染之后出现的，较疫情前组、防控期组上呼吸道感染导致OME在中耳炎患者中的比例升高，差异均有统计学意义（P<0.01）。爆发期组上呼吸道感染导致OME患者年龄高于疫情前组和防控期组，差异有统计学意义（P<0.01,P=0.002）。74.6%的患者在新冠病毒感染之后的1～3周发病，7.5%的患者（5/67）在感染1月后才出现耳部症状。50.7%的患者仅有耳部症状且电子鼻咽喉镜检查仅31.3%合并鼻、鼻咽部轻微炎症。结论 新冠病毒感染可明显提高OME发病率，老年人患病率更高。新冠相关OME往往在感染后2周甚至更晚出现。新冠病毒有可能通过直接感染中耳引发炎症，具体机制有待进一步研究。
Waardenburg综合征患者人工耳蜗植入术后疗效Meta分析
秦锋;郭思荃;马敬;陆晓宇;目的 通过比较Waardenburg综合征（waardenburg syndrome,WS）患者与非Waardenburg综合征患者人工耳蜗植入术后听力言语恢复效果，明确人工耳蜗植入术能否成为WS患者治疗的有效方式,从而指导临床工作。方法在PubMed、The Cochrane Library、中国知网、维普医学、万方数据检索国内外关于WS人工耳蜗植入的文献，使用Revman5.41对符合纳入标准的文献临床数据进行Meta分析。结果 本研究纳入的文献中，其中包括108例WS患者及785例对照组，Meta分析显示WS组与对照组在术后听觉行为分级标准（Categories of Auditory Performance, CAP）(WS组48例,对照组620例)(MD=-0.10,95%CI:-0.38～0.17,P=0.46)、言语可懂度分级标准（speech intelligibility rating,SIR)评分(WS组48例,对照组620例)(MD=-0.23,95%CI:-0.68～0.22,P=0.31)及青少年儿童及婴幼儿听说能力评估问卷家长观察记录表(parents'evaluation of aural/oral performance of children,PEACH)[电话评分(WS组37例,对照组53例)(MD=0.13,95%CI:-0.48～0.74,P=0.68)、安静评分(WS组37例,对照组53例)(MD=-0.01,95%CI:-0.10～0.09,P=0.91)、噪音评分(WS组37例，对照组53例)(MD=-0.01,95%CI:-0.11～0.10,P=0.88)]比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 WS患者人工耳蜗植入术后听力言语恢复与非WS综合征患者基本一致。
血浆同型半胱氨酸及叶酸代谢酶基因(MTHFR)多态性与突发性耳聋的相关性研究进展
黄阳;冯春;突发性感音神经性耳聋(sudden sensorineural hearing loss,SSNHL)是耳鼻喉科常见病,严重危害人们的生活健康。其发病原因尚不清楚,有文献报道高血浆同型半胱氨酸和低叶酸水平与血管损伤相关,并被作为新的独立风险因素。动物实验证实叶酸可以改善同型半胱氨酸血症小鼠的内耳血供。但有关叶酸与患者耳聋的发病机制及相关性仍知之甚少。叶酸代谢过程中起关键作用的酶类主要有亚甲基四氢叶酸还原酶、甲硫氨酸合成酶、甲硫氨酸合成还原酶等,这些叶酸代谢相关营养素以及环境暴露因素之间的交互作用可能与SSNHL相关。目前对叶酸缺乏与听力下降的关系研究不是很多,在SSNHL的文献中关于血管病因学的证据仍存在矛盾。本文旨在对这一相关研究做一综述。
DAPT对离体培养的基底膜的影响
李新新;杨仕明;郭维维;邢光前;目的观察新生大鼠体外培养的基底膜在Notch通路被阻断的情况下,毛细胞的生长变化情况。方法取新生(P0)SD大鼠耳蜗基底膜进行体外培养,采用自身对照的方式,实验组基底膜加入含Notch通路阻断剂DAPT(终浓度为5μM)的高糖培养基,对照组不加DAPT,培养5天(P5)后,用激光共聚焦显微镜观察毛细胞的生长变化情况。P0时采用逆转录PCR检测Notch通路的存在与否,P5时采用实时定量PCR检测阻断Notch通路后下游基因的变化情况。结果实验组经DAPT的处理后有毛细胞的增多,逆转录PCR证实了出生第一天时尚有Notch通路的存在,实时定量PCR证实DAPT处理后Hes1和Hes5表达降低,而Math1表达升高。结论新生大鼠中Notch通路活性尚存,加入Notch通路阻断剂DAPT后,抑制毛细胞生成的Hes1和Hes5表达降低,而促毛细胞生成的Math1表达升高,并且,通过形态学观察和统计学分析发现毛细胞数目增多。
豚鼠外周血单个核细胞与耳蜗组织中糖皮质激素体含量的相关性分析
陆玲;张秀玲;杨秭莹;吴骎;戴艳红;佘万东;目的通过分析豚鼠外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)与耳蜗组织中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA和蛋白含量变化,探讨PBMC与耳蜗组织中GR含量的相关性。方法将32只健康白色豚鼠随机分为地塞米松组和对照组,地塞米松组予地塞米松(5mg/ml,10mg/kg/day)腹腔连续注射7天,对照组予等体积的生理盐水腹腔连续注射7天。给药结束后次日取豚鼠PBMC及双侧耳蜗组织,通过实时荧光定量PCR检测豚鼠PBMC和左耳耳蜗组织中GR mRNA表达水平,通过Western blot结果半定量分析豚鼠PBMC和右侧耳蜗组织中GR蛋白的含量,并运用统计学软件SPSS16.0进一步分析豚鼠PBMC与耳蜗组织中GR mRNA及GR蛋白表达量的相关性及短期全身使用地塞米松对其表达量的影响。结果 GR mRNA与GR蛋白在豚鼠PBMC与耳蜗组织中均有表达,地塞米松组PBMC及耳蜗组织中GR mRNA与GR蛋白含量较对照组有明显提高,统计学相关性分析结果提示地塞米松组及对照组的PBMC与耳蜗组织的GR mRNA、GR蛋白表达量存在正相关,结果有统计学意义。结论豚鼠短期全身使用地塞米松可以使PBMC与耳蜗组织中的GR mRNA、GR蛋白含量均同步上调,豚鼠PBMC与耳蜗组织中GR mRNA、GR蛋白的含量变化具有正相关性。PBMC中GR含量可间接反映耳蜗组织的GR表达水平。
安阳市特教学校重度感音性聋分子病因学分析——GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告
林红艳;刘新;戴朴;于飞;杨淑芝;孙勍;朱庆文;袁永一;刘丽贤;目的调查河南省安阳地区重度感音神经性耳聋聋病分子病因学情况。方法对安阳市聋哑学校160 名学生进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试,对其中154名非综合征性感音神经性耳聋患者进行线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变检测和GJB2基因突变检测。结果 8例(5．19％)存在线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变;11例(7．14％)存在GJB2 235delc纯合突变;13例(8．44％)存在GJB2 235delC杂合突变,在分子水平能够明确诊断者占20．77％。结论安阳地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率,特别是线粒体DNA A1555G突变发生率高于全国平均水平,通过聋病分子诊断,可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。